اصل اساسی سنتز DNA

سنتز DNA شیمیایی بر اساس استراتژی سنتز فاز جامد و شیمی فسفورامیدیت است.متفاوت از سنتز DNA بیولوژیکی، ماده در سنتز DNA شیمیایی DMT (4، 4-dimethoxytrityl) و دئوکسی ریبوکسی ساید اصلاح شده با فسفورامیدیت است، همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است.ستون سنتز الیگو، یعنی CPG (شیشه منافذ کنترل شده) و PS (پلی استایرن) و کل سنتز بر روی یکسنتز کننده DNA/RNAکه تجهیزات اصلی ما می باشد دارای مدل های مختلفی مانند: HY Single Channel Synthesizer، HY-12، HY-192 و غیره است، جهت سنتز از 3' تا 5' است و یک نوکلئوتید از طریق یک به تکیه گاه جامد وارد می شود. چرخه سنتزیک چرخه سنتز معمولاً شامل چهار مرحله است، محافظت زدایی، جفت، دربندی و اکسیداسیون (شکل 2).Deprotection برای حذف گروه DMT روی تکیه گاه جامد یا گروه هیدروکسیل 5' روی نوکلئوزید قبلی تنظیم شده است، اسید تری کلرواستیک 3 درصد در دی کلرومتان به عنوان معرف محافظت زدایی استفاده می شود.سپس دئوکسی‌ری‌بوکسی‌ساید اصلاح‌شده با فسفورامیدیت با کمک فعال‌کننده، یعنی 5-اتیل تیوتترازول یا 4، 5-دی سیانوئیمیدازول، اجازه داده شد تا گروه هیدروکسیل را در معرض قرار دهد و فسفیتتریستر (III) را تشکیل می‌دهد و مرحله جفت شدن را انجام می‌دهد.یک مرحله دربندی برای مسدود کردن گروه هیدروکسیل واکنش نداده در طول مرحله جفت انجام می شود تا تشکیل توالی نقص نامطلوب به حداقل برسد.در نهایت، فسفیتتریستر ناپایدار (III) با ید به عنوان اکسیدان در حال حاضر پیریدین به فسفورتریستر شیمیایی پایدار (V) اکسید می شود.

DNA سنتز شده را می توان با آمینولیز از تکیه گاه جامد جدا کرد، گروه محافظت شده 2-سیانو اتیل روی فسفورتریستر و آمید روی نوکلئوباز به طور همزمان جدا می شود، صفحات سنتز و ستون های سنتز در قفسه ها مستقیماً در محفظه واکنش قرار می گیرند. ازتجهیزات حفاظتی.DNA خام را می توان با HPLC، الکتروفورز و OPC در صورت تقاضا تهیه کرد، ما همچنین می توانیم به شما ارائه دهیم.تجهیزات تصفیهبرای پس پردازش