اصول سنتز اسید نوکلئیک

سنتز اسید نوکلئیک با استفاده از روش تری گلیسرید آمید سیالیک فاز جامد انجام می شود، به این ترتیب انتهای 3' DNA روی یک بستر فاز جامد تثبیت می شود و نوکلئوتیدها در جهت 3' تا 5' اضافه می شوند تا قطعه DNA مورد نظر سنتز شود. .این با استفاده از DNA پلیمراز با سنتز DNA متفاوت است.

انتهای 3' پایه اول در طول سنتز بر روی CPG بی حرکت می شود، 5'-OH پایه بعدی با دی-پی-تولیل تریتیل DMT، گروه آمینه روی پایه با اسید بنزوئیک و 3' محافظت می شود. -OH سپس با یک ترکیب آمینو فسفات فعال می شود.1 پایه از 5 5'-OH از 1 باز و 3'-OH از پایه بعدی یک تری گلیسیرید فسفیت را تشکیل می دهند که سپس با ید اکسید می شود و به یک تری گلیسیرید فسفات تبدیل می شود و محافظ روی پایه دوم 5'-OH با استفاده از آن حذف می شود. افزودن دی کلرواستیک اسید DM از طریق افزودن باز بعدی چرخه می‌زند و پس از سنتز، محافظ روی 5'-OH با اسید ضعیف حذف می‌شود. قطعه با هیدروکسید آمونیوم غلیظ از رزین جامد جدا می‌شود، محافظ از پایه خارج می‌شود. با هیدروکسید آمونیوم غلیظ تحت حرارت، هیدروکسید آمونیوم حذف می شود، قطعه در خلاء خشک می شود و اسید نوکلئیک با کروماتوگرافی مایع یا PAGE خالص می شود.

مراحل سنتز الیگو

این

فعال سازی

اختلاط فعال کننده با مونومر اولیگونوکلئوتید برای تشکیل واسطه مونومر الیگونوکلئوتید فعال.

جفت

دربندی 

علاوه بر این از یک ماده درپوش ، یک واکنش پوشش استیله را با گروه های هیدروکسیل اضافی که در واکنش تراکم دخیل نیستند ، انجام می دهد.

اکسیداسیون 

محصول اسید نوکلئیک پس از سنتز، با افزودن محلول DEA برای حذف گروه سیانو اتیل از پیوند تری گلیسیرید فسفات.

Cleaved&Deprotection

قطعات اسید نوکلئیک با اضافه کردن یک محلول هیدروکسید آمونیوم غلیظ از حامل فاز جامد جدا می شوند و سپس گرم می شوند تا گروه های محافظ از پیوندهای هیدروژن پایه ها خارج شوند.